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半干转印系统是Western Blot(蛋白质免疫印迹)中用于将蛋白质从凝胶转移到膜(如PVDF或NC膜)的关键组件。与传统湿转相比,半干转印系统具有操作简便、转印时间短、试剂消耗少等优势。
1. 系统组成与工作原理
(1)核心组件
组件功能
转印槽(Transfer Cell)容纳电极板、滤纸、凝胶和膜,提供稳定的电场环境
电极板(阳极/阴极)通常为石墨或铂金材质,确保电流均匀分布
缓冲液垫(Filter Paper Pads)浸渍转印缓冲液,代替传统湿转的液体缓冲液槽
电源模块提供恒定电流/电压(通常15-25V,转印30-60分钟)
(2)工作原理
“三明治”结构组装:依次叠放阳极板→缓冲液垫→凝胶→膜→缓冲液垫→阴极板。
电场驱动转印:在电流作用下,带负电的蛋白质从凝胶向膜(正极侧)迁移。
半干环境:缓冲液仅存在于滤纸和凝胶/膜界面,无需大量液体。
2. 操作步骤(以PVDF膜为例)
激活膜:PVDF膜需甲醇浸泡1分钟,NC膜可直接使用。
浸泡滤纸:将滤纸浸透转印缓冲液(如Tris-Glycine含甲醇)。
组装“三明治”:
阳极板(+)
滤纸(3层)
凝胶(SDS-PAGE胶)
膜(紧贴凝胶无气泡)
滤纸(3层)
阴极板(-)
转印设置:恒定电流1-2 mA/cm²(膜面积),时间30-60分钟(视蛋白大小)。
转印后处理:膜用TBST洗涤,进行封闭和抗体孵育。
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